توسعه روش ELISA غیر مستقیم برای تشخیص آنتی بادی IgG کروناویروس سندرم اسهال حاد خوک بر اساس پروتئین نوترکیب سنبله

Coronavirus سندرم اسهال حاد خوک (SADS-CoV) یک ویروس کرونای بیماری زا روده خوک تازه کشف شده است که می تواند باعث اسهال آبکی در خوکچه های تازه متولد شده شود و خسارات اقتصادی قابل توجهی به صنعت خوک وارد کند.در حال حاضر هیچ روش سرولوژیکی مناسبی برای ارزیابی اثربخشی عفونت SADS-CoV و واکسن وجود ندارد، بنابراین نیاز فوری به استفاده از روش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم (ELISA) برای جبران این کمبود وجود دارد.در اینجا، یک پلاسمید نوترکیب بیان کننده پروتئین SADS-CoV (S) که با دامنه IgG Fc انسانی ترکیب شده است برای تولید باکولوویروس نوترکیب ساخته شد و در سلول‌های HEK 293F بیان شد.پروتئین S-Fc با رزین پروتئین G خالص می شود و واکنش پذیری را با آنتی بادی های ضد Fc انسانی و ضد SADS-CoV حفظ می کند.سپس از پروتئین S-Fc برای ایجاد الایزای غیرمستقیم (S-iELISA) و بهینه سازی شرایط واکنش S-iELISA استفاده شد.در نتیجه، با تجزیه و تحلیل مقدار OD450nm 40 سرم SADS-CoV منفی تایید شده با روش ایمونوفلورسانس (IFA) و وسترن بلات، مقدار برش 0.3711 تعیین شد.ضریب تغییرات (CV) 6 سرم SADS-CoV مثبت در داخل و بین اجرای S-iELISA همگی کمتر از 10٪ بود.آزمایش واکنش متقاطع نشان داد که S-iELISA هیچ واکنش متقابلی با سایر سرم‌های ویروس خوک ندارد.علاوه بر این، بر اساس تشخیص 111 نمونه سرم بالینی، میزان همزمانی کلی IFA و S-iELISA 97.3٪ بود.تست خنثی سازی ویروس با 7 مقدار مختلف OD450nm سرم نشان داد که مقدار OD450nm شناسایی شده توسط S-iELISA با تست خنثی سازی ویروس همبستگی مثبت دارد.در نهایت، S-iELISA بر روی 300 نمونه سرم مزرعه خوک انجام شد.کیت های تجاری سایر انتروویروس های خوک نشان داد که میزان IgG مثبت SADS-CoV، TGEV، PDCoV و PEDV به ترتیب 81.7٪، 54٪ و 65.3٪ بود.، به ترتیب 6٪.نتایج نشان می دهد که S-iELISA خاص، حساس و قابل تکرار است و می تواند برای تشخیص عفونت SADS-CoV در صنعت خوک استفاده شود.این مقاله توسط کپی رایت محافظت می شود.تمامی حقوق محفوظ است